pBV-BPI600重组表达载体的构建及其在E. coli中的表达

首都医科大学学报 ›› 2001, Vol. 22 ›› Issue (1): 1-5.

pBV-BPI600重组表达载体的构建及其在E. coli中的表达

安云庆, 刘箐, 柯岩, 沈海中

首都医科大学微生物学和免疫学教研室

收稿日期:2000-04-17 修回日期:1900-01-01 出版日期:2001-01-15 发布日期:2001-01-15

Construction of pBV-BPI600 Recombinant Expression Vector and its Expression in E. coli

An Yunqing, Liu Qing, Ke Yan, Shen Haizhong

Department of Microbiology and Immunology, Capital University of Medical Sciences

Received:2000-04-17 Revised:1900-01-01 Online:2001-01-15 Published:2001-01-15

摘要/Abstract

摘要： ①采用RT-PCR技术,以qHL-60细胞mRNA为模板扩增获得编码BPI氨基端193个氨基酸(rBPI₂₁)的基因片段(BPI600);EcoRI/BamHI酶切扩增产物获得BPI200bp和BPI400bp2个基因片段.②成功构建PUC18-BPI200和PUC18-BPI400重组克隆载体,DNA测序分析结果与文献报道一致.③成功构建pBV220-BPI600重组表达载体;转化E.coliDH5α感受态细胞,诱导目的重组蛋白表达;经SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定,证实表达的重组蛋白确为外源基因(BPI600bp)编码的产物BPI₂₁重组蛋白.

关键词: 重组杀菌/渗透增强蛋白, pBV220表达载体, PUC18克隆载体

Abstract: BPI 600 bp gene which encode 193 amino acid fragments(rBPI₂₁)BPI N-terminal was amplified by RT-PCR from mRNA that were extracted from qHL-60; It was digested by EcoRI and BamHI to obtain BPI 400 bp and BPI 200 bp fragments.②PUC18-BPI200 and PUC18-BPI400 recombinant cloning vector were successfully constructed, and sequences were identical with those of the report. ③pBV-BPI600 recombinant expression vector was successfully constructed, It was transformated into the competent E. coli DH5α and BPI₂₁ recombinant protein was expressed by temperature induced method. The results of SDS-PAGE and Western blot has proved that the expressed recombinant protein is rBPI₂₁ which is encoded by BPI600 gene.

Key words: recombinant bactericidal/permeability increasing protein, pBV220 expression vector, PUC18 cloning vector

中图分类号:

R392.1

安云庆;刘箐;柯岩;沈海中. pBV-BPI600重组表达载体的构建及其在E. coli中的表达[J]. 首都医科大学学报, 2001, 22(1): 1-5.

An Yunqing;Liu Qing;Ke Yan;Shen Haizhong. Construction of pBV-BPI600 Recombinant Expression Vector and its Expression in E. coli[J]. Journal of Capital Medical University, 2001, 22(1): 1-5.

[1]	白若靖, 吕诗韵, 画伟, 吴昊, 代丽丽. LILRB2过表达慢病毒载体以及THP-1-LILRB2稳转细胞株的构建[J]. 首都医科大学学报, 2023, 44(1): 93-98.
[2]	李默, 韩德强, 赵宇, 陈志国. 使细胞治疗成为攻克疾病的新一代技术手段——陈志国教授[J]. 首都医科大学学报, 2020, 41(5): 778-782.
[3]	冯雪婷, 张晨光, 张敏, 岳志霞, 邢天禹, 李慎涛, 丁卫. HaloTag技术在α-突触核蛋白质的细胞影像与定量分析中的应用[J]. 首都医科大学学报, 2014, 35(3): 324-330.
[4]	李晓波, 顾建娟, 赵春松, 王淑艳, 关云谦, 陈凌, 张愚. 慢病毒载体介导的人磷脂磷酸水解酶3基因在人脐带间充质干细胞中的表达[J]. 首都医科大学学报, 2013, 34(6): 872-878.
[5]	史小翠, 冯小燕, 宋然, 杨龙燕, 贺俊崎. 帕金森大鼠消化道组织中蛋白质NHERF家族和CAL的表达变化[J]. 首都医科大学学报, 2013, 34(2): 232-238.
[6]	曹云霞;;吴燕川;徐胜利;周明;张宇新. 共聚物-1直接免疫MPTP模型小鼠保护多巴胺能神经元[J]. 首都医科大学学报, 2010, 31(6): 760-765.
[7]	张国民;乔媛媛;陈宇萍;吕喆;安云庆. 从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗角蛋白scFv[J]. 首都医科大学学报, 2007, 28(1): 71-74.
[8]	毕晓郁;高丽芳;曹丽歌;陈振良;吴涛;殷召雪;苏忆兰;蒋致诚. 螺旋藻葛根片对小鼠免疫功能的影响[J]. 首都医科大学学报, 2007, 28(1): 78-80.
[9]	杨强;聂秀红;王烁;张连国;肖汉;李小静;张霖;刘明芳. 严重急性呼吸综合征患者细胞免疫功能的变化[J]. 首都医科大学学报, 2003, 24(4): 385-388.
[10]	沈悦;梁宏;孙兆军;付士红;梁国栋. 蚯蚓纤溶酶PI₂₃₉基因在杆状病毒中的表达[J]. 首都医科大学学报, 2003, 24(1): 23-26.
[11]	安云庆;柯岩;靖学芳;杨贵贞. 定点突变对BPI₂₃-Fcγ1重组抗菌蛋白表达和复性率的影响[J]. 首都医科大学学报, 2002, 23(3): 197-201.
[12]	安云庆;柯岩;陈金栋. 人IgG1FccDNA的克隆与鉴定[J]. 首都医科大学学报, 2000, 21(2): 93-96.
[13]	靖学芳. 植物血凝素激活的LAK细胞激活培养条件与其生物学特性关系的研究[J]. 首都医科大学学报, 1997, 18(2): 105-109.
[14]	陈海伦;王鸿;诸小侬;黄志刚. 癌患者的NK细胞和LAK细胞活性及MPS治疗对其的影响[J]. 首都医科大学学报, 1996, 17(3): 193-196.
[15]	沈海中;张力平;赵文明;夏楠. 银杏叶提取物对小鼠淋巴细胞和中性粒细胞活性的影响[J]. 首都医科大学学报, 1994, 15(4): 254-256.