蚯蚓纤溶酶PI239基因在杆状病毒中的表达

首都医科大学学报 ›› 2003, Vol. 24 ›› Issue (1): 23-26.

蚯蚓纤溶酶PI₂₃₉基因在杆状病毒中的表达

沈悦¹, 梁宏¹, 孙兆军², 付士红², 梁国栋²

1. 首都医科大学临床医学科技中心;2. 中国预防医科院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

收稿日期:2002-01-05 修回日期:1900-01-01 出版日期:2003-01-15 发布日期:2003-01-15

Expression of Lumbrukinase PI₂₃₉ Gene in the Insect Cell using Baculovirus Expression Vector System

Shen Yue¹, Liang Hong¹, Sun Zhaojun², Fu Shihon², Liang Guodong²

1. Clinic Science and Technology Center, Capital University of Medical Sciences;2. National Point Laboratory of Genetic Engineering, Virus Graduate School, Prevention in China Medical Science Section College

Received:2002-01-05 Revised:1900-01-01 Online:2003-01-15 Published:2003-01-15

摘要/Abstract

摘要： 利用基因重组技术将PI₂₃₉基因通过细菌/杆状病毒(Bac-to-Bac)表达系统构建重组杆状病毒表达载体,载体采用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒,将重组病毒转染昆虫Sf9细胞,细胞出现明显病变。SDSPAGE电泳可以见到相对分子质量3.0万位置有蛋白表达,免疫印记结果表明该条带可以与PI₂₃₉抗体反应。提示蚯蚓纤溶酶PI₂₃₉重组蛋白已经获得表达,为进一步研究蚯蚓纤溶酶PI₂₃₉基因的生物学活性奠定了基础。

关键词: 蚓激酶, 杆状病毒, 表达

Abstract: The objective of the study was to better understand the thrombolytic enzyme in earthworm (lumbrukinase). By using the baculovirus expression vector system, PI₂₃₉ protein was expressed in the insect cell. The PI₂₃₉ gene was inserted into the donor plasmid pFastbac. Through transposition, recombinant bacmid PI₂₃₉ DNA was formed and was then transfected into Sf9 insect cells to produce recombinant Baculovirus. Sf9 insect cell were infected with recombinant Baclovirous. The harvested culture supernatant and cells lysate occured after 72h, the SDS-PAGE and Western Blot analysis. The SDS-PAGE analysis revealed that molecular weight of expressed protein was 30000. Western blot showed that PI₂₃₉ protein could be recognized by specific antiPI₂₃₉ antibody. The PI₂₃₉ protein can be expressed on the insect cell Sf9.

Key words: lumbrukinase, baculovirus, express

中图分类号:

R392.1

沈悦;梁宏;孙兆军;付士红;梁国栋. 蚯蚓纤溶酶PI₂₃₉基因在杆状病毒中的表达[J]. 首都医科大学学报, 2003, 24(1): 23-26.

Shen Yue;Liang Hong;Sun Zhaojun;Fu Shihon;Liang Guodong. Expression of Lumbrukinase PI₂₃₉ Gene in the Insect Cell using Baculovirus Expression Vector System[J]. Journal of Capital Medical University, 2003, 24(1): 23-26.

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蚯蚓纤溶酶PI₂₃₉基因在杆状病毒中的表达

Expression of Lumbrukinase PI₂₃₉ Gene in the Insect Cell using Baculovirus Expression Vector System

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