人酪氨酸羟化酶全长及催化核心序列的克隆与表达

首都医科大学学报 ›› 2000, Vol. 21 ›› Issue (4): 277-280.

人酪氨酸羟化酶全长及催化核心序列的克隆与表达

熊英¹, 刘华¹, 于培兰¹, 张澄波¹, 杨慧², 徐群渊²

1. 首都医科大学生化教研室;2. 北京市神经科学研究所

收稿日期:2000-05-17 修回日期:1900-01-01 出版日期:2000-10-15 发布日期:2000-10-15

Clonging and Expression for DNA Fragment of Complete Sequence and Catalytic Domain of Human Tyrosine Hydroxylase

Xiong Ying¹, Liu Hua¹, Yu Peilan¹, Zhang Chengbo¹, Yang Hui², Xu Qunyuan²

1. Department of Biochem, Capital University of Medical Sciences;2. Beijing Institute for Neuroscience

Received:2000-05-17 Revised:1900-01-01 Online:2000-10-15 Published:2000-10-15

摘要/Abstract

摘要： 设计合成含适当酶切位点的PCR引物,以人的全长THcDNA为模板,进行PCR扩增反应,得到人酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)全长及催化核心序列,将其分别插入谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1,转化入大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达,SDSPAGE、westernblotting分析表达产物。结果获得了编码N-端缺失145个氨基酸的酪氨酸羟化酶催化结构域的cDNA片段及带一定内切酶识别位点的全长片段,表达载体构建正确。插入片段序列与人THmRNA相应序列完全一致。转入重组质粒的菌经诱导后,有相对分子质量约为8.3万及6.6万的外源融合蛋白表达,并得到较纯的酶蛋白.

关键词: 酪氨酸羟化酶, 表达, 催化核心, 全长序列

Abstract: In order to obtain complete sequence and catalytic core of human tyrosine hydroxylase(TH) cDNA,the full length of cDNA from human TH was used as template and the specific oligonucleotide primers were designed for PCR.The target fragments were cloned into vector pGEX-4T-1 respectively.The recombinant plasmids were transferred into E.coli BL21,and the expression of target protein was induced with IPTG.The expressed protein was analysed by SDS-PAGE and western-blotting.The result showed that the cDNA fragments of complete sequence and catalytic core of human TH were harvested.The sequencing for them showed that the cloned target gene fragments were correct.SDS-PAGE indicated that the proteins with Mr about 83000 and 66000 were expressed with the recombinant plamids pGEXTHa and pGEXTHc respectively.

Key words: tyrosine hydroxylase, expression, catalytic core, complete seque

中图分类号:

Q546

熊英;刘华;于培兰;张澄波;杨慧;徐群渊. 人酪氨酸羟化酶全长及催化核心序列的克隆与表达[J]. 首都医科大学学报, 2000, 21(4): 277-280.

Xiong Ying;Liu Hua;Yu Peilan;Zhang Chengbo;Yang Hui;Xu Qunyuan. Clonging and Expression for DNA Fragment of Complete Sequence and Catalytic Domain of Human Tyrosine Hydroxylase[J]. Journal of Capital Medical University, 2000, 21(4): 277-280.

[1]	张健雄, 李丹丹, 胡梦梦, 程雪微, 董瑞华. 羧酸酯酶1和羧酸酯酶2基因表达量与体质量指数的关系及其基因多态性分析[J]. 首都医科大学学报, 2023, 44(1): 13-19.
[2]	粟文婷, 於佳楠, 贾军, 王晓民. 电针对帕金森病模型小鼠纹状体背侧的c-Fos表达的选择性调节[J]. 首都医科大学学报, 2021, 42(6): 986-992.
[3]	姚健楠, 高天博, 段凌, 刘健, 蒋玉良, 安广宇, 葛洋. 结直肠癌中O-型糖基化相关差异基因的筛选及分析[J]. 首都医科大学学报, 2020, 41(3): 403-410.
[4]	徐文剑, 李巍. 基于全血基因表达谱的脑组织基因表达量预测模型的建立[J]. 首都医科大学学报, 2019, 40(5): 731-737.
[5]	牛欢, 程杉, 丁卫. 2018年拉斯克奖(Ⅰ)——基础医学研究奖及医学特殊成就奖[J]. 首都医科大学学报, 2018, 39(5): 778-782.
[6]	毕阔, 秦佳佳, 杨静, 诸欣平. 旋毛虫膜蛋白新基因Tmp10的免疫筛选及鉴定[J]. 首都医科大学学报, 2015, 36(2): 232-238.
[7]	法朋燕, 刘华, 郑君芳, 王磊, 代元平, 贺俊崎. NHERF3在肾癌组织中的表达变化及其意义[J]. 首都医科大学学报, 2015, 36(2): 251-254.
[8]	张春, 刘军, 蒋宏传, 黄京伟, 曲士颖, 王铁. 乳腺癌相关差异表达基因的筛选及分析[J]. 首都医科大学学报, 2013, 34(1): 1-5.
[9]	殷爱红;武文琦;崔世军;滕旭;郑少鹏. 低氧诱导VEGF基因表达载体治疗家兔肢体缺血性疾病的实验研究[J]. 首都医科大学学报, 2012, 33(3): 356-360.
[10]	武文琦;丛旭珍;殷爱红;胡家;翟方丽;李慎涛. 变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A的表达、纯化与鉴定[J]. 首都医科大学学报, 2012, 33(2): 227-232.
[11]	刘扬;赵咏梅;张海燕;李卫红;岳云. 6-OHDA诱导过表达nurr1基因的SK-N-SH细胞凋亡[J]. 首都医科大学学报, 2011, 32(4): 525-533.
[12]	李卫民;黄海荣;高峰;刘毅;范伟兴;戴广明;姜广路;宋小运;赵立平;付玉红. 北京基因型结核分枝杆菌感染THP-1细胞系表达谱的研究[J]. 首都医科大学学报, 2011, 32(3): 346-351.
[13]	刘晓娟△;张力青△;李健;翟方丽;李慎涛;. γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化[J]. 首都医科大学学报, 2011, 32(2): 254-258.
[14]	石英;刘宁;计云霞;魏征;张彤;陈德喜;娄金丽. 外周血CD4⁺T淋巴细胞表面CCR5受体表达水平与HIV感染关系的研究[J]. 首都医科大学学报, 2010, 31(6): 711-714.
[15]	邢风玲;陈雪芹;冯力民;张华. 绝经后服用他莫西芬的乳腺癌患者子宫内膜中PTEN的表达[J]. 首都医科大学学报, 2010, 31(3): 405-408.