人VEGF基因昆虫杆状病毒表达载体的构建

首都医科大学学报 ›› 2004, Vol. 25 ›› Issue (2): 159-161.

人VEGF基因昆虫杆状病毒表达载体的构建

孙丽翠, 王雅梅, 祁雅慧, 闫豫东, 张静宜

首都医科大学实验中心

收稿日期:2003-10-29 修回日期:1900-01-01 出版日期:2004-04-15 发布日期:2004-04-15

Construction of Insect Baculovirus Expression Vector of Human VEGF Gene

Sun Licui, Wang Yamei, Qi Yahui, Yan Yudong, Zhang Jingyi

Experiment Center, Capital University of Medical Sciences

Received:2003-10-29 Revised:1900-01-01 Online:2004-04-15 Published:2004-04-15

摘要/Abstract

摘要： 为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因,用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575bp的VEGF片段,与pFastBacI载体连接,得到含VEGF基因的转座载体pFast/VEGF,NcoI酶切鉴定方向;将其转化到含有穿梭载体杆粒(Bacmid)的DH10Bac感受态细胞,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid/VEGF,采用琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增对重组转座载体、穿梭载体进行鉴定。将Bacmid/VEGF转染sf-9细胞,进行病毒重组及噬斑筛选。结果:琼脂糖电泳得到杆粒(Bacmid)DNA条带,PCR扩增得到575bp的VEGF片段,病毒液在10^-7稀释度时出现噬斑,约50个/孔。说明已成功构建了重组杆状病毒穿梭载体并重组出杆状病毒。

关键词: 人VEGF, 重组杆状病毒载体, PCR, 噬斑筛选

Abstract: Using Hind Ⅲ enzyme to digest pcDNA3.1/VEGF, the VEGF fragment (575 bp) was obtained. The recombinant transposition vector pFast/VEGF including VEGF gene was constructed and identified with NcoI enzyme reaction. It was transformed into DH10Bac competent cell to recombine baculovirus shuttle vector Bacmid/VEGF. Agrose electrophoresis and PCR amplication were used to determine recombinant vector. The Bacmid/VEGF was transfected into sf-9 cell to screen virus plaque. As a result, agrose electrophoresis observed bacmid DNA band, PCR amplication obtained 575 bp VEGF fragment, virus solution appeared plaque in diluting to 10^-7 concentration(about 50 plaques/well).

Key words: human VEGF, recombinant baculovirus vector, PCR, plaque screening

中图分类号:

孙丽翠;王雅梅;祁雅慧;闫豫东;张静宜. 人VEGF基因昆虫杆状病毒表达载体的构建[J]. 首都医科大学学报, 2004, 25(2): 159-161.

Sun Licui;Wang Yamei;Qi Yahui;Yan Yudong;Zhang Jingyi. Construction of Insect Baculovirus Expression Vector of Human VEGF Gene[J]. Journal of Capital Medical University, 2004, 25(2): 159-161.

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