首都医科大学学报 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (3): 324-330.
张鑫1#,武彦宁1#,张大可2,董培玲1,范春蕾1,李磊1,丁惠国1*
ZHANG Xin1#, WU Yan-ning1#, ZHANG Da-ke2, DONG Pei-ling1, FAN Chun-lei1, LI Lei1, 1*
摘要: 目的 阐明HBV(hepatitis B virus,HBV)感染患者不同临床阶段bcp/pc(basic core promoter, BCP/precore,PC) 点突变模式及pres区缺失突变规律,并探讨其临床意义。
方法慢性HBV感染患者180例,其中,无症状HBV携带者13例,慢性乙型肝炎者75例,HBV相关肝硬化及肝癌分别为62、30例。Qiagen法提取血清HBV-DNA,常规PCR扩增目的基因,纯化PCR产物ABI377DNA自动测序仪直接双向测序。直接测序失败者,回收目的DNA与PMD-18T载体连接,克隆质粒双向测序。DNAStar软件包的SeqMan软件进行生物信息分析。
结果 Bcp/pc区点突变包括nt 1753、nt 1762 、nt 1764 、nt 1776 、nt 1803、nt 1846 、nt 1896。HBV携带者、慢性乙型肝炎、HBV相关肝硬化及肝癌患者nt 1762(nt 1764)点突变率分别为 7.7%、68.0%、72.7%(68.0%)及90.9%(81.8%),肝癌患者G1896A突变频率占54.6%。A1762T+G1764A联合突变占36%;A1762T、G1764A、G1896A联合突变占11%;T1753A/C、A1762T、G1764A、G1896A发生率为7%。克隆测序显示,肝硬化及肝癌患者bcp区起始点A1727G点突变率分别为72%、63%。HBeAg阴性患者存在更多的基因变异(P=0.022),G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素(P<0.05)。Bcp区点突变与HBeAg阴性无明显关系。肝硬化和肝癌患者pres基因缺失突变频率最高,肝癌及肝硬化患者pres1、pres2及pres1+s2缺失频率分别为7.1%、71.4%、7.1% 及41.2%、58.8%、29.4%(P<0.05)。
结论 A1727G、A1762T、G1764A及A1762T/G1764A联合突变、pres缺失在HBV相关肝硬化及肝癌患者多见,可能是肝脏疾病进展的危险因素,G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素。Bcp/pc点突变及pres区缺失可能为肝癌发生的早期预测因素,值得进一步研究。
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