小鼠骨髓中性粒细胞分离纯化及活性检测研究

doi:10.3969/j.issn.1006-7795.2018.05.014

首都医科大学学报 ›› 2018, Vol. 39 ›› Issue (5): 699-703.doi: 10.3969/j.issn.1006-7795.2018.05.014

小鼠骨髓中性粒细胞分离纯化及活性检测研究

杨琳, 田蕾, 周璇, 杨乐, 李丽英

首都医科大学细胞生物学系, ‘肝脏保护和再生调节’北京市重点实验室, 北京 100069

收稿日期:2018-02-11 出版日期:2018-09-21 发布日期:2018-10-20
通讯作者: 李丽英 E-mail:liliying@ccmu.edu.cn
基金资助:
国家自然科学基金（81670550）。

Separation, purification and identification of mouse bone marrow neutrophils

Yang Lin, Tian Lei, Zhou Xuan, Yang Le, Li Liying

Department of Cell Biology, Capital Medical University;Municipal Laboratory for Liver Protection and Regulation of Regeneration, Beijing 100069, China

Received:2018-02-11 Online:2018-09-21 Published:2018-10-20
Supported by:
This study was supported by National Natural Science Foundation of China(81670550).

摘要/Abstract

摘要： 目的探究小鼠骨髓中性粒细胞分离纯化，并进行鉴定以及活性的检测。方法使用密度梯度离心法分离纯化小鼠骨髓中性粒细胞，得到的中性粒细胞采用免疫荧光法和高内涵分析仪检测中性粒细胞表面标志物Ly6G的表达。同时对得到的细胞加入佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）刺激后，采用免疫荧光的方法检测中性粒细胞释放髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）的表达情况。结果用Histopaque^©-1077、Histopaque^©-1119分离纯化小鼠骨髓细胞后，细胞表达Ly6G，将分离纯化的细胞加入100 nmol/L PMA刺激2 h后检测MPO的表达增强，实验组是对照组的（3.26±0.22）倍。结论该方法是一种简单、易操作的体外分离纯化、鉴定小鼠骨髓中性粒细胞的方法。

关键词: 小鼠, 骨髓中性粒细胞, 分离纯化, 鉴定

Abstract: Objective For separation, purification and identification of mouse neutrophils from bone marrow. Methods Mouse bone marrow neutrophils were separated by density gradient centrifugation. Immunofluorescence and High Content Screening were used to detect the expression of Ly6G. Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) was used to induce the expression of myeloperoxidase(MPO) released by neutrophils by immunofluorescent staining. Results After the mouse bone marrow cells were purified with Histopaque^©-1077, Histopaque^©-1119, the cells expressed Ly6G. High Content Screening was used to detect the expression of MPO, as demonstrated by the increased expression of MPO (3.26±0.22) stimulated by 100 nmol/L PMA for 2 hours. Conclusion It was a simple method for separation, purification and identification of mouse neutrophils from bone marrow.

Key words: mouse, bone marrow neutrophils, isolation, identification

中图分类号:

杨琳, 田蕾, 周璇, 杨乐, 李丽英. 小鼠骨髓中性粒细胞分离纯化及活性检测研究[J]. 首都医科大学学报, 2018, 39(5): 699-703.

Yang Lin, Tian Lei, Zhou Xuan, Yang Le, Li Liying. Separation, purification and identification of mouse bone marrow neutrophils[J]. Journal of Capital Medical University, 2018, 39(5): 699-703.

参考文献

[1] Bouma G, Ancliff P J, Thrasher A J, et al. Recent advances in the understanding of genetic defects of neutrophil number and function[J]. Br J Haematol, 2010, 151(4):312-326.
[2] 刘义庆,卢冰如,张炳昌,等. 中性粒细胞的功能及其与自身免疫性疾病关联性研究进展[J].中国免疫学杂志, 2014, 30(5):712-716.
[3] Elbim C, Estaquier J. Cytokines modulate neutrophil death[J]. Eur Cytokine Netw, 2010, 21(1):1-6.
[4] Phillipson M, Kubes P. The neutrophil in vascular inflammation[J]. Nat Med, 2011, 17(11):1381-1390.
[5] Jaeschke H, Williams C D, Ramachandran A, et al. Acetaminophen hepatotoxicity and repair:the role of sterile inflammation and innate immunity[J]. Liver Int, 2012, 32(1):8-20.
[6] 郑小莉,罗波,梅志强,等.Percoll分离法结合免疫磁珠法分离提纯人外周血中性粒细胞方法的建立[J]. 现代医药卫生, 2011, 27(18):2723-2724.
[7] 呼沛然,白苗娜,李萌璐,等. 3种获得中性粒细胞方法的比较及应用的探讨[J]. 国际检验医学杂志, 2014, 35(16):2123-2125.
[8] 邹常春.全血中性粒细胞分离方法的改进研究[J]. 实验与检验医学, 2009, 27(4):337-338,344.
[9] Bertola A, Park O, Gao B. Chronic plus binge ethanol feeding synergistically induces neutrophil infiltration and liver injury in mice:a critical role for E-selectin[J]. Hepatology, 2013, 58(5):1814-1823.
[10] Masia R, Krause D S, Yellen G. The inward rectifier potassium channel Kir2.1 is expressed in mouse neutrophils from bone marrow and liver[J]. Am J Physiol Cell Physiol, 2015, 308(3):C264-276.
[11] Döring Y, Soehnlein O, Weber C. Neutrophils cast NETs in atherosclerosis:employing peptidylarginine deiminase as a therapeutic target[J]. Circ Res, 2014, 114(6):931-934.
[12] Martinod K, Wagner D D. Thrombosis:tangled up in NETs[J]. Blood, 2014, 123(18):2768-2776.
[13] Han Z, Zhu T P, Liu X H, et al. 15-deoxy-Δ12,14-prostaglandin J2 reduces recruitment of bone marrow-derived monocyte/macrophages in chronic liver injury in mice[J]. Hepatology, 2012, 56(1):350-360.
[14] 刘建峰, 华琦.中性粒细胞/淋巴细胞比值与心血管疾病的关系[J].中国煤炭工业医学杂志,2016,19(4):650-655.
[15] 田翠, 任华亮,聂皓,等.流式细胞术检测小鼠主动脉组织中炎性反应细胞浸润的方法研究[J].首都医科大学学报,2015,36(4):618-621.
[16] 殷霞丽,李勇,吴瑶,等. CB2受体激动剂对肝脏I/R小鼠肝功能及肝组织MPO及MDA表达的影响[J]. 山东医药,2014,54(38):35-36.
[17] 于睿鹏,范潇婷,童宏选,等. 喜树碱对小鼠骨髓中性粒细胞XIAP、TLR4、CXCR2表达及细胞凋亡影响的研究[J]. 江苏中医药,2017,49(6):80-82.

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Separation, purification and identification of mouse bone marrow neutrophils

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[2]	钱芳, 姜利, 刘永东, 黄晶, 任燕明, 刘玉东, 李峨嵋, 原景, 裴爽, 赵延, 孙文秀, 禹利燕, 张晓萍, 张新梅, 王楠. 北京市西城区区属医院入院患者多重耐药菌快速筛查情况分析[J]. 首都医科大学学报, 2021, 42(6): 936-942.
[3]	马登磊, 李延峥, 祝艳秋, 李林, 张兰. 山茱萸环烯醚萜苷对快速老化小鼠行为学及病理学改变的影响[J]. 首都医科大学学报, 2021, 42(5): 754-760.
[4]	高丽芳, 郜文. 番茄红素与姜黄素联用对急性乙醇氧化损伤小鼠的抗氧化作用[J]. 首都医科大学学报, 2021, 42(1): 89-93.
[5]	许晴, 刘丽娜, 宋妍婷, 曲爱娟. 超声二维斑点追踪技术分析小鼠颈动脉僵硬度的方法学研究[J]. 首都医科大学学报, 2018, 39(6): 883-888.
[6]	张贺, 勾荣彬, 牛含虚, 孙晓红, 徐群渊, 段德义. 胰岛素样生长因子结合蛋白4转基因小鼠脑内细胞分化的研究[J]. 首都医科大学学报, 2018, 39(6): 910-916.
[7]	胡墨绳, 张华, 王雷, 杨秀云, 马峰杰, 秦彩虹, 白银. 民航飞行员的听力损失状况及其影响因素的调查研究[J]. 首都医科大学学报, 2018, 39(6): 955-960.
[8]	陈荣卷, 陈其瑞, 许江南, 丁跃中. 阻断CD40-CD40L信号通路对小鼠肺移植术后闭塞性细支气管炎的影响[J]. 首都医科大学学报, 2018, 39(2): 258-264.
[9]	肖鲁瑶, 张杰, 郑帅, 梅少帅. pH值和剂量对腹腔注射L-精氨酸诱导小鼠急性胰腺炎模型的影响[J]. 首都医科大学学报, 2017, 38(5): 700-703.
[10]	陈玢, 刘伟, 史志国, 刘涛, 郑晖. 七氟烷与高浓度氧对老年小鼠海马caspase-3的表达及认知功能的影响[J]. 首都医科大学学报, 2017, 38(3): 348-351.
[11]	杨苑儒, 周璇, 张若辰, 李丽英, 杨乐. S1PR1/3介导骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化的信号通路探讨[J]. 首都医科大学学报, 2017, 38(2): 277-281.
[12]	陈晨, 杨翠翠, 李林, 张兰. 5月龄APP/PS1双转基因小鼠行为学及老年斑病理改变[J]. 首都医科大学学报, 2016, 37(6): 784-788.
[13]	高丽芳, 罗葵, 崔淑香. 外源性核苷酸对小鼠非酒精性肝损伤保护作用初探[J]. 首都医科大学学报, 2016, 37(3): 356-359.
[14]	包训杰, 蔡彦宁, 祝艳秋, 杨翠翠, 李林, 张兰. 3xTg-拟AD小鼠脑内七种时钟基因启动子区甲基化分析[J]. 首都医科大学学报, 2015, 36(6): 875-881.
[15]	刘迎新, 邹大威, 耿建国, 高彦彬, 尚雅文, 李娇阳, 龚慕辛, 彭麒朕. 糖肾宁对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织HGF表达的影响[J]. 首都医科大学学报, 2015, 36(5): 747-750.