人碱性成纤维细胞生长因子在昆虫细胞sf9中的表达

首都医科大学学报 ›› 2004, Vol. 25 ›› Issue (4): 431-434.

人碱性成纤维细胞生长因子在昆虫细胞sf9中的表达

王雅梅, 孙丽翠, 祁雅慧, 司杨, 闫豫东, 殷红, 张静宜

首都医科大学实验中心

收稿日期:2004-06-28 修回日期:1900-01-01 出版日期:2004-10-15 发布日期:2004-10-15
通讯作者: 祁雅慧

Expression of Human Basic Fibroblast Growth Factor Gene in sf9 Insect Cell

Wang Yamei, Sun Licui, Qi Yahui, Si Yang, Yan Yudong, Yin Hong, Zhang Jingyi

Experiment Center, Capital University of Medical Sciences

Received:2004-06-28 Revised:1900-01-01 Online:2004-10-15 Published:2004-10-15

摘要/Abstract

摘要： 将人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因 cDNA克隆到pFastBacI转移载体中,重组质粒转化到感受态细胞DH10Bac中,使目的基因转座入Bacmid DNA中,纯化DNA后,利用病毒噬斑实验筛选重组的杆状病毒.重组杆状病毒感染Sf9细胞,在Sf9细胞中进行表达.Western印迹结果表明:表达产物为相对分子质量约17 000的蛋白,与预计的重组蛋白相对分子质量相同,并具有较好的免疫学活性.MTT检测证实表达产物能明显促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的分裂增生,具有hbFGF的生物学活性.

关键词: 碱性成纤维细胞生长因子, 昆虫细胞sf9, 基因表达

Abstract: The cDNA encoding human basic fibroblast growth factor(bFGF) was cloned into a transfer factor pFastBac1. After transformation, it was introduced into E.coli DH10Bac. By site-specific transposition, hbFGF gene was intergrated into Bacmid DNA. The isolated recombinant Bacmid DNA were transfected into sf9 insect cells and baculovirus stocks were harvested from the transfected cells. The expressed recombinant hbFGF proteins with the molecular weight of 17 000 were identified by Western blot analysis. MTT results show that rhbFGF proteins have bioactivity to stimulated HUVEC proliferation.

Key words: basic fibroblast growth factor, sf9 insect cell, gene expression

中图分类号:

Q785

王雅梅;孙丽翠;祁雅慧;司杨;闫豫东;殷红;张静宜. 人碱性成纤维细胞生长因子在昆虫细胞sf9中的表达[J]. 首都医科大学学报, 2004, 25(4): 431-434.

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