基因重组型人SORL1蛋白质片段的原核表达和纯化

doi:10.3969/j.issn.1006-7795.2011.06.018

首都医科大学学报 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (6): 798-801.doi: 10.3969/j.issn.1006-7795.2011.06.018

• 帕金森病的发病机制研究 • 上一篇下一篇

基因重组型人SORL1蛋白质片段的原核表达和纯化

李爽¹, 李尧华¹, 叶懿文¹, 李昕¹, 于顺¹, 杨慧², 陈彪¹

1. 首都医科大学宣武医院老年病研究所神经生物学研究室,教育部神经变性病重点实验室,北京100053;2. 首都医科大学北京神经科学研究所,北京市神经再生修复研究重点实验室, 教育部神经变性病重点实验室,北京 100069

收稿日期:2011-10-16 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-12-21 发布日期:2011-12-21
通讯作者: 李尧华

Prokaryotic expression and purification of recombinant human SORL1 protein

LI Shuang¹, LI Yao-hua¹, YE Yi-wen¹, LI Xin¹, YU Shun¹, YANG Hui², CHEN Biao¹

1. Department of Neurobiology, Beijing Institute of Geriatrics, Key Laboratory for Neurodegenerative Diseases, Ministry of Education;Xuanwu Hospital, Capital Medical University, Beijing 100053, China;2. Beijing institute for Neuroscience, Capital Medical University, Beijing center for Neural Regeneration & Repair;Key Laboratory for Neurodegenerative Disease, Ministry of Education, Beijing 100069, China

Received:2011-10-16 Revised:1900-01-01 Online:2011-12-21 Published:2011-12-21

摘要/Abstract

摘要： 目的制备基因重组型人SORL1蛋白质片段,为探讨阿尔茨海默病的发病机制提供实验基础。方法采用PCR方法扩增人sorl1 cDNA 编码区5 923~6 260 bp片段,克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。用大肠杆菌BL21(DE3)plysS表达重组质粒,用液相色谱法纯化基因重组蛋白。结果 PCR扩增产物为358 bp,其ATG和TGA之间的结构与人sorl1 cDNA的5 923~6 260 bp区完全一致。基因重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中高效表达,其表达产物存在于包涵体组分中。纯化的基因重组蛋白在SDS-PAGE中表现为单一条带,表观分子量约为13 000。结论人sorl1 cDNA 的5 923~6 260 bp片段在原核细胞中大量表达,纯化后的基因重组蛋白可尝试用于抗体的制备。

关键词: 含L(DLR类)A重复分拣蛋白相关受体, 基因重组蛋白, 阿尔茨海默病

Abstract: Objective To prepare the recombinant human SORL1 protein, and provide the experimental foundation for study about the pathogenesis of Alzheimer's disease. Methods A human sorl1 cDNA fragment(5 923~6 260 bp) was amplified by PCR, and subucloned into pET-28a(+) vector. Recombinant plasmid was expressed by E.coli BL21(DE3), and the recombinant protein was purified by liquid chromatography. Results A 358 bp cDNA fragment was amplified by PCR method. Its structure between the ATG and TGA was completely consistent with the human sorl1 cDNA fragment(5 923~6 260 bp). The recombinant plasmid in E.coli BL21(DE3) was highly expressed and its expression product was mainly in the inclusion body. The purified protein on SDS-PAGE demonstrated a single band, which appeared to have a molecular weight of about 13 000. Conclusion Human sorl1 cDNA fragment was highly expressed in prokaryotic cells. The purified recombinant protein can be used to prepare antibodies.

Key words: sortilin-related receptor, L(DLR class) A repeats-containing, recombinant protein, Alzheimer's disease

中图分类号:

Q 189

李爽;李尧华;叶懿文;李昕;于顺;杨慧;陈彪. 基因重组型人SORL1蛋白质片段的原核表达和纯化[J]. 首都医科大学学报, 2011, 32(6): 798-801.

LI Shuang;LI Yao-hua;YE Yi-wen;LI Xin;YU Shun;YANG Hui;CHEN Biao. Prokaryotic expression and purification of recombinant human SORL1 protein[J]. Journal of Capital Medical University, 2011, 32(6): 798-801.

[1]	孟霞, 李梦, 王晶晶, 张静, 陈柏安, 卢静. 5xFAD转基因小鼠与阿尔茨海默病患者大脑中β-淀粉样蛋白特征的异同[J]. 首都医科大学学报, 2022, 43(1): 106-112.
[2]	马登磊, 李延峥, 祝艳秋, 李林, 张兰. 山茱萸环烯醚萜苷对快速老化小鼠行为学及病理学改变的影响[J]. 首都医科大学学报, 2021, 42(5): 754-760.
[3]	詹敏敏, 马慧萱, 康雪纯, 鲁新亮, 宫淑婷, 邹琦, 吕继辉, 周爱红, 贾建平, 魏翠柏. 轻中度阿尔茨海默病患者精神行为学症状特点及关联性分析[J]. 首都医科大学学报, 2021, 42(3): 354-359.
[4]	胡月青, 吕继辉, 王嫱, 马宗娟, 李文杰, 母海燕, 李沫, 高文超, 贾东梅. 音乐疗法联合强光治疗对阿尔茨海默病患者睡眠障碍的疗效观察[J]. 首都医科大学学报, 2021, 42(3): 367-372.
[5]	郝淑文, 陈瑛, 丁晖, 赵春松, 梁阔, 薛金花, 蔡彦宁. 阿尔茨海默病、轻度认知功能障碍及主观认知下降患者血液DNA中多个基因的甲基化分析[J]. 首都医科大学学报, 2021, 42(3): 447-452.
[6]	李妍. 守护“记忆之魂”的中国痴呆临床研究引领者——贾建平教授[J]. 首都医科大学学报, 2020, 41(5): 822-827.
[7]	杨翠翠, 包训杰, 张丽, 李雅莉, 李林, 张兰. 7月龄及16月龄APP/PS1/tau三转基因小鼠脑内突触相关蛋白的变化及山茱萸环烯醚萜苷的影响[J]. 首都医科大学学报, 2020, 41(3): 391-396.
[8]	杨翠翠, 包训杰, 张丽, 李雅莉, 李林, 张兰. 山茱萸环烯醚萜苷对APP/PS1/Tau三转基因小鼠脑内病理变化的影响[J]. 首都医科大学学报, 2019, 40(4): 588-595.
[9]	唐煜, 郝单单, 秦玮婷, 文潇, 李放. 轻度阿尔茨海默病患者年龄对蒙特利尔认知评估量表基本版得分的影响[J]. 首都医科大学学报, 2019, 40(4): 652-655.
[10]	樊响, 杨延辉, 贾秀琴, 卢洁, 李坤成. 轻度认知障碍静息态功能磁共振研究低频振幅分析[J]. 首都医科大学学报, 2018, 39(2): 163-166.
[11]	金贺, 赵志炜, 王蓉. 追赶生长与阿尔茨海默病相关性[J]. 首都医科大学学报, 2017, 38(6): 831-834.
[12]	尹晓敏, 徐婷, 戴伍飞, 钱嘉逸, 陈晨, 张兰, 李林. 二苯乙烯苷对神经细胞淀粉样肽前体蛋白表达的影响及其与CREB调节相关的作用机制[J]. 首都医科大学学报, 2017, 38(6): 835-840.
[13]	李雪莲, 杨翠翠, 张兰, 石京山. 山茱萸环烯醚萜苷对蛋白磷酸酶2A催化亚基C磷酸化的调节机制[J]. 首都医科大学学报, 2016, 37(6): 777-783.
[14]	杨翠翠, 李林, 张丽, 李雅莉, 张兰. 马钱苷通过抑制蛋白磷酸酶2A催化亚基C磷酸化降低tau蛋白过度磷酸化[J]. 首都医科大学学报, 2016, 37(6): 789-793.
[15]	李晖, 齐志刚, 李坤成. 针灸治疗阿尔茨海默病机制研究进展[J]. 首都医科大学学报, 2015, 36(5): 809-813.

基因重组型人SORL1蛋白质片段的原核表达和纯化

Prokaryotic expression and purification of recombinant human SORL1 protein

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价