TPRC3通道对MPP+所致MN9D细胞损伤的保护作用

首都医科大学学报 ›› 2008, Vol. 29 ›› Issue (2): 153-157.

TPRC3通道对MPP⁺所致MN9D细胞损伤的保护作用

张雷¹, 王军锋², 葛瑞良³, 王晓民¹

1. 首都医科大学生理学系;2. 中科院上海生命科学院神经科学研究所;3. 第二军医大学东方肝胆外科医院

收稿日期:2007-12-15 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-04-24 发布日期:2008-04-24
通讯作者: 王晓民

TRPC3 mediated Inhibition of MPP⁺ Neurotoxicity in MN9D Cells

Zhang Lei¹, Wang Junfeng², Ge Ruiliang³, Wang Xiaomin¹

1. Department of Physiology, Capital Medical University;2. Institute of Neuroscience, Chinese Academy of Sciences;3. Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, the Second Military Medical University

Received:2007-12-15 Revised:1900-01-01 Online:2008-04-24 Published:2008-04-24

摘要/Abstract

摘要： 目的探讨经典瞬间受体电位通道蛋白(transient receptor potential canonical channel,TRPC)家族在1-甲基4-苯基吡啶离子(1-Methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP⁺)导致的MN9D细胞毒性损伤中的作用.方法用不同浓度(62.5、125、250、500、1 000 μmol/L)的MPP⁺处理MN9D细胞24 h,500 μmol/L MPP⁺处理MN9D细胞不同时间(3、6、12、24、36 h),建立细胞损伤模型.用RT-PCR的方法检测MN9D细胞中内源性TRPC的表达情况;500 μmol/L MPP⁺作用于MN9D细胞,以Western blot法检测MN9D细胞内源性TR-PC表达的变化;构建GFP与TRPC3 GFP腺病毒载体,转染到MN9D细胞中,以四甲基偶氮唑盐比色法(methods the tetrazolium,MTT)的方法检测过表达的TRPC3对MPP⁺引起的MN9D细胞损伤的保护作用.结果 500 μmol/L MPP⁺处理MN9D细胞6h就可以显著降低细胞内TRPC3蛋白水平的表达,但对TRPC6的表达无影响.过表达TRPC3能够保护MN9D细胞免受MPP⁺的毒性损伤.结论 MPP⁺特异性地降低MN9D细胞TRPC3蛋白水平,过表达TRPC3可以抑制MPP⁺引起的MN9D细胞损伤.这种现象提示TRPC3通道可能参与了帕金森病发病的分子机制.

关键词: 帕金森病, 1-甲基4-苯基吡啶离子, 经典瞬间受体电位通道蛋白, 神经保护

Abstract: Objective To study the effect of transient receptor potential-canonical channel(TRPC) on MPP⁺-induced MN9D cell damage. Methods The MN9D cell damage model was induced by treating MN9D cells with different concentrations(62.5, 125, 250, 500, 1 000 μmol/L) of MPP⁺ for 24 h and with 500 μmol/L MPP⁺ for different time course(3, 6, 12, 24, 36 hours). The mRNA expression of the members of TRPC subfamily was investigated by RT-PCR and the protein levels of TRPCs by Western blot in MN9D cells. MTT was performed to detect TRPC3-mediated inhibition of MPP⁺ neurotoxicity in MN9D cells transfected by TRPC3-GFP and GFP adenovirus. Results 500 μmol/L MPP⁺ specifically reduced the protein levels of TRPC3 in MN9D cells and overexpression of TRPC3 protected MN9D cells from MPP⁺ neurotoxicity. Conclusion Degradation of TRPC3 induced by MPP⁺ was probably involved in pathogenesis of Parkinson's disease(PD) and this study maybe provide a new target to prevent and treat PD.

Key words: Parkinson's disease, MPP⁺, TRPC, neuroprotective effect

中图分类号:

R741.5

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