γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化

首都医科大学学报 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (2): 254-258.

γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化

刘晓娟^1△，张力青^1△，李健³，翟方丽¹，李慎涛^1，2*

1. 首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系； 2. 首都医科大学基础医学院免疫学系；3. 清华大学第一附属医院华信医院检验科

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-04-21 发布日期:2011-04-21
通讯作者: 李慎涛

Cloning, Expression and Purification of Human Synuclein Gamma

LIU Xiao-juan^1△, ZHANG Li-qing^1△, LI Jian³, ZHAI Fang-li¹, LI Shen-tao^1,2*

1. Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medical Sciences, Capital Medical University;2. Department of Immunology, School of Basic Medical Sciences, Capital Medical University; 3. Clinical Laboratoryof Huaxin Hospital, First Hospital of Tsinghua University

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-04-21 Published:2011-04-21
Contact: LI Shen-tao

摘要/Abstract

摘要：

目的对γ-突触核蛋白（synuclein）基因进行克隆，并对其表达及纯化条件进行优化。
方法根据GenBank中γ-突触核蛋白的基因序列，设计PCR引物，从人脑cDNA文库中扩增γ-突触核蛋白的编码DNA序列，将其克隆至pGEX-6p-1载体中，构建重组质粒，将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，用IPTG诱导表达；对培养温度、IPTG的用量、诱导时间等条件进行了优化；用SDS-PAGE和质谱分析表达的目标蛋白；用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化目标蛋白。
结果 γ-突触核蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达，经质谱鉴定及SDS-PAGE分析，表达产物为γ-突触核蛋白。经过纯化，得到纯度高达98%的γ-突触核蛋白。
结论成功地在大肠杆菌中高效表达了γ-突触核蛋白，并建立了纯化工艺，得到高纯度的重组蛋白，为进一步研究γ-突触核蛋白的晶体结构、生物学活性及功能，探讨其在肿瘤中的发病机制奠定了基础。

关键词: &gamma, -突触核蛋白, 融合蛋白, 原核表达, 蛋白纯化

Abstract:

Objective To study cloning, prokaryotic expression and purification of human synuclein gamma.
Methods A DNA fragment encoding human synuclein gamma was amplified by polymerase chain reaction from a human cDNA library and was cloned into vector pGEX-6p-1. The construct carrying the coding DNA sequence of synuclein gamma fused with GST was transformed into E.coli BL21(DE3), and the fusion protein of synuclein gamma and GST was expressed by induction with IPTG. The product was purified by affinity chromatography, ion exchange chromatography and gel filtration.
Results Human synuclein gamma was successfully expressed in E.coli in soluble form. The product was identified to be human synuclein gamma by SDS-PAGE and mass spectrography. After purification, the purity of the recombinant protein was more than 98%.
Conclusion An effective purification protocol was established. Recombinant synuclein gamma with a purity more than 98% was obtained, which provided a basis for the further studies of the crystal structure, biological activities and functions of synuclein gamma.

Key words: synuclein gamma, fusion protein, prokaryotic expression, purification

中图分类号:

Q 71

刘晓娟△;张力青△;李健;翟方丽;李慎涛;. γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化[J]. 首都医科大学学报, 2011, 32(2): 254-258.

LIU Xiao-juan△;ZHANG Li-qing△;LI Jian;ZHAI Fang-li;LI Shen-tao;. Cloning, Expression and Purification of Human Synuclein Gamma[J]. Journal of Capital Medical University, 2011, 32(2): 254-258.

[1]	高歌, 查旭, 刘伟进, 杨慧. 129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白DELFIA检测方法的建立及初步应用[J]. 首都医科大学学报, 2021, 42(5): 776-782.
[2]	宋启晗, 李旭冉, 李昕, 杨巍巍, 李伟, 于顺. 不同亚型的帕金森病及多系统萎缩患者血浆α-突触核蛋白寡聚体浓度分析[J]. 首都医科大学学报, 2020, 41(2): 212-216.
[3]	李杰, 谢秀娟, 宋炜, 潘维花, 杨巍巍, 于顺. 帕金森病患者血浆增强α-突触核蛋白细胞毒性及其机制研究[J]. 首都医科大学学报, 2019, 40(2): 244-250.
[4]	宫晓丽, 刘梦茹, 王乐, 刘玚, 张婷, 孙英, 王晓民. α-突触核蛋白在小胶质细胞炎性反应和吞噬功能中的作用研究[J]. 首都医科大学学报, 2018, 39(5): 693-698.
[5]	刘梦茹, 宫晓丽, 王乐, 刘玚, 张婷, 王晓民. 脂多糖对肠道α-突触核蛋白表达的影响[J]. 首都医科大学学报, 2018, 39(4): 557-562.
[6]	卢勇泉, 陈敏, 高歌, 段春礼, 鲁玲玲, 杨慧. TRPC3参与α-突触核蛋白引起的线粒体损伤[J]. 首都医科大学学报, 2017, 38(6): 857-862.
[7]	陈敏, 于文娇, 李昕, 杨巍巍, 李旭冉, 于顺. α-突触核蛋白通过上调内吞蛋白Rab5B促进海马神经元膜表面NMDA受体内在化[J]. 首都医科大学学报, 2017, 38(6): 863-867.
[8]	于文娇, 杨巍巍, 李昕, 李旭冉, 陈敏, 于顺. α-突触核蛋白通过Rab5B下调海马神经元膜表面NMDA受体含量及其介导的Ca²⁺内流和内向电流[J]. 首都医科大学学报, 2017, 38(6): 868-873.
[9]	杨巍巍, 李昕, 李旭冉, 于顺. 食蟹猴脑与结肠中寡聚化和磷酸化α-突触核蛋白的增龄性变化的相关性分析[J]. 首都医科大学学报, 2017, 38(6): 874-878.
[10]	郑凇杨, 李昕, 杨巍巍, 李旭冉, 李旭颖, 于文娇, 于顺. 糖尿病患者血浆减少α-突触核蛋白的磷酸化和寡聚化[J]. 首都医科大学学报, 2017, 38(6): 879-883.
[11]	杨巍巍, 李旭冉, 李昕, 李旭颖, 于顺. 脑血红蛋白表达增高可减轻α-突触核蛋白引起的MES23.5细胞凋亡[J]. 首都医科大学学报, 2016, 37(6): 799-805.
[12]	高歌, 汪志鹏, 段春礼, 鲁玲玲, 杨慧. 原子力显微镜检测α-突触核蛋白转基因鼠线粒体微观结构的变化[J]. 首都医科大学学报, 2016, 37(6): 806-811.
[13]	杨巍巍, 李旭冉, 李昕, 李旭颖, 于顺. α-突触核蛋白与血红蛋白复合物的形成可致线粒体中血红蛋白减低[J]. 首都医科大学学报, 2016, 37(5): 621-625.
[14]	王雪, 申甲梅, 高歌, 段春礼, 鲁玲玲, 杨慧. PINK1减轻α-突触核蛋白引起的线粒体损伤[J]. 首都医科大学学报, 2016, 37(1): 70-75.
[15]	张如意, 张丽, 李林. 线粒体功能障碍、α-突触核蛋白与帕金森病[J]. 首都医科大学学报, 2015, 36(6): 861-864.