兔气管纤毛蛋白磷酸化的初步研究

首都医科大学学报 ›› 2009, Vol. 30 ›› Issue (1): 54-56.

兔气管纤毛蛋白磷酸化的初步研究

刘晨^1,2, 韩德民^1,2, 张罗^1,2

1. 首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科;2. 北京市耳鼻咽喉科研究所,耳鼻咽喉头颈科学教育部重点实验室

收稿日期:2008-11-18 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-02-21 发布日期:2009-02-21
通讯作者: 张罗

Primary Studies on Phosphorylation Profile of Ciliary Proteins in Trachea of Rabbit

Liu Chen^1,2, Han Demin^1,2, Zhang Luo^1,2

1. Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery, Beijing Tongren Hospital, Capital Medical University,;2. Beijing Institute of Otolaryngology, Key Laboratory of Otolaryngology Head and Neck Surgery, Ministry of Education

Received:2008-11-18 Revised:1900-01-01 Online:2009-02-21 Published:2009-02-21

摘要/Abstract

摘要： 目的建立分离提取呼吸道纤毛的方法,为进一步研究纤毛蛋白磷酸化在纤毛运动调控机制中的作用提供方法学基础。方法用Triton X-100分离缓冲液孵育兔气管黏膜上皮,使纤毛上皮细胞的纤毛与细胞体分离,通过离心提取分离的纤毛,将提取的标本行透射电镜观察、Western blotting小鼠检测β微管蛋白(β-tubulin)和纤毛蛋白磷酸化情况。结果 1 透射电镜观察可见提取的标本为浓集的纤毛,纤毛的横断面可见典型的"9+2"结构;2 Western blotting检测可见高信号强度的β-tubulin条带;3 Western blotting检测可见5条酪氨酸磷酸化的蛋白条带。结论经含有Triton X-100的缓冲液孵育的兔气管黏膜上皮离心后可提取到分离的纤毛标本,适于进行进一步的纤毛蛋白磷酸化研究。

关键词: 纤毛, 分离, 磷酸化

Abstract: Objective To establish a method of cilia isolation from airway epithelium and provide the methods of further studying the role of the protein phosphorylation in the mechanisms of ciliary motility. Methods The rabbit trachea epithelium was incubated in isolation buffer containing Triton X-100 in order to isolate the cilia from the epithelial tissue. Cilia were then collected by centrifugation. The sample was examined by electron microscopy, and the β-tubulin and the phosphorylated proteins were visualized by Western blotting. Results 1 The electron micrograph demonstrated a highly enriched ciliary preparation showing the characteristic features of intact axoneme; 2 Western blotting analysis showed visible bands of β-tubulin; 3 Western blotting analysis detected five tyrosine phosphorylated bands. Conclusion The ciliary preparation can be obtained by incubating the rabbit airway epithelium in isolation buffer containing Triton X-100 and the following centrifugation. The preparation can be used to study the role of the protein phosphorylation in the mechanisms of ciliary motility.

Key words: cilia, isolation, phosphorylation

中图分类号:

Q 471

刘晨;韩德民;张罗;. 兔气管纤毛蛋白磷酸化的初步研究[J]. 首都医科大学学报, 2009, 30(1): 54-56.

Liu Chen;Han Demin;Zhang Luo;. Primary Studies on Phosphorylation Profile of Ciliary Proteins in Trachea of Rabbit[J]. Journal of Capital Medical University, 2009, 30(1): 54-56.

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