首都医科大学学报 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (3): 318-323.
常路丝1，乔雍1，魏洪莲2，肖凡1，郝晓花1，张仁雯3，成军1，魏红山1*
CHANG Lu-si1, QIAO Yong1, WEI Hong-lian2, XIAO Fan1, HAO Xiao-hua1, ZHANG Ren-wen3, CHENG Jun1, WEI Hong-shan1*
摘要： 目的 体外原核表达C18ORF54的重组蛋白，对其进行纯化，制备兔抗C18ORF54蛋白多克隆抗体，并对该重组蛋白对HepG2细胞可能的生物学作用进行初步研究。
方法 应用反转录聚合酶链反应（reverse transcription PCR，RT-PCR）技术，以HepG2细胞总RNA为模板，反转录并扩增c18orf54目的基因片段，构建原核表达载体pET-32a(+)-c18orf54。转化大肠埃希菌BL21(DE3)，异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖（isopropyl β D thiogalacttpy ranoside，IPTG）诱导并通过十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium lauryl sulfatepolyacrylamide gol electrophoresis，SDS-PAGE）分析、免疫印迹（Western blotting）、生物质谱技术分析证实c18orf54Z重组蛋白表达正确。用Ni+亲和柱纯化表达蛋白。C18ORF54重组蛋白免疫新西兰兔，获得抗c18orf54蛋白的多克隆抗体。以纯化的C18ORF54蛋白为抗原，分别以免疫前后的新西兰兔血清作为第一抗体，利用Western blotting和酶联免疫吸附（enzyine linked immunosorbent assay，ELISA）法对多克隆抗体进行特异性分析及效价检测。将不同浓度范围的C18ORF54重组蛋白与培养的HepG2细胞共孵育，初步了解该重组蛋白对HepG2细胞可能的生物学作用。
结果 PCR法扩增获得c18orf54基因片段，成功表达了C18ORF54重组蛋白，经SDSPAGE和Western blotting分析得到证实。成功获得重组蛋白及抗C18ORF54多克隆抗体。ELISA检测证实多克隆抗体效价>1∶320 000。
结论 利用大肠埃希菌BL21(DE3)能够成功表达C18ORF54蛋白，获得高特异性、高效价兔抗C18ORF54重组蛋白的多克隆抗体，为今后研究C18ORF54蛋白的生物学特性奠定了基础。
中图分类号:
